脊髓损伤修复相关10号基因编码蛋白与促甲状腺激素释放激素受体2的相互作用

摘要

背景:前期研究中,通过酵母双杂交系统筛选出可能与脊髓损伤修复相关10号基因(No10,SCIRR10)编码蛋白相互作用的蛋白质,其中含有促甲状腺激素释放激素受体2(thyrotropin releasing hormone receptor2,TRH R2),而SCIRR10与TRH R2是否存在相互作用尚未阐明。目的:验证SCIRR10蛋白是否作用TRH R2受体,进一步确认TRH R2为SCIRR10蛋白受体,为下一步研究提供可靠实验证据。方法:应用RT-PCR方法扩增SCIRR10和TRH R2基因,构建带有绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白标签的真核重组表达质粒GFP-SCIRR10和RFP-TRH R2,分别转染真核细胞COS7,培养16h后,将表达SCIRR10-GFP的细胞培养液加入到表达受体TRH R2-RFP细胞中继续培养。4h后,用40g/L多聚甲醛固定细胞,于激光共聚焦显微镜下观察蛋白GFP-SCIRR10和蛋白RFP-TRH R2两者相互结合情况。结果与结论:在荧光条件下仅能观察到SCIRR10-GFP与TRH R2-RFP相互结合,而其他对照没有观察到类似现象。通过实验以及前期研究结果证实TRHR R2就是SCIRR10作用受体。