缺氧诱导因子-1α对体外模拟CO2气腹下人胃癌细胞凋亡的影响

摘要

目的通过体外模拟CO2气腹环境,构建沉默缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的RNAi表达载体,探讨HIF-1α对CO2气腹环境下人胃癌细胞MKN-45凋亡的影响及机制。方法利用密闭培养箱模拟CO2气腹,气腹机维持培养箱内压力分别为0、5、10、15 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）,采用RT-PCR方法和Western blot方法观察沉默HIF-1α前后MKN-45细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达变化。免疫组化技术观察沉默HIF-1α前后细胞bcl-2/bax表达变化。Annexin V-FITC/PI双标染色、流式细胞仪检测沉默HIF-1α前后细胞凋亡比例变化。结果沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达（1.48±0.22和1.34±0.09）以及10 mm Hg组细胞蛋白表达（1.25±0.10）均显著高于对照组（0.55±0.17和0.83±0.04）（P＜0.05）。0、5、10 mm Hg组细胞HIF-1αmRNA和0、5 mm Hg蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。沉默HIF-1α前15 mm Hg组细胞bcl-2/bax比值（0.78±0.05）较对照组（1.43±0.15）明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡比例（11.70±0.12）较对照组（0.22±0.07）显著增加（P＜0.01）。而在沉默HIF-1α后15 mm Hg组细胞HIF-1αmRNA表达（0.52±0.11）和蛋白表达（0.92±0.02）、bcl-2/bax比值（1.57±0.04）、细胞凋亡比例（0.45±0.11）与对照组比较均无显著差异（P＞0.05）。结论在CO2气腹环境压力为0、5、10 mmHg CO2时MKN-45细胞凋亡比例与对照组比较无显著差异,压力为15 mm Hg时CO2气腹可促进胃癌细胞凋亡,HIF-1α可能为促进细胞凋亡的重要因子。