永生化人肝窦内皮细胞株的形态和功能特性研究

摘要

目的研究永生化人肝窦内皮细胞（LSEC）株的形态和功能特性,评价其作为体外研究肝缺血再灌注损伤的细胞材料的可行性。方法首先应用细胞免疫荧光染色、荧光显微镜以及流式细胞术检测LSEC细胞株的纯度,透射和扫描电子显微镜技术观察细胞内的W-P小体和吞噬磁珠的能力以及细胞表面窗孔结构。然后利用MTT法检测细胞的生长曲线,ELISA法比较TNF-α刺激后人LSEC细胞株和原代LSEC黏附分子、纤溶活性分子和细胞因子的表达。最后采用TUNEL法比较两者对冷缺血再灌注损伤诱导凋亡的敏感性。结果所建立的人LSEC细胞株纯度达到95%以上。在形态上,人LSEC细胞株胞质内含有W-P小体,表面具有LSEC特异的窗孔结构。在功能上,人LSEC细胞株具有吞噬磁珠的能力和较强的增殖能力。在TNF-α刺激下,人LSEC细胞株和人原代LSEC均剂量依赖性表达ELAM-1和ICAM-1,释放PAI-1、t-PA和u-PA;但人LSEC细胞株不产生IL-6和IL-8。经冷缺血再灌注后,人LSEC细胞株的凋亡细胞百分率达到（38.4±6.7）%,明显高于人原代LSEC的（28.6±4.5）%和人脐静脉内皮细胞的（7.8±1.2）%。结论已建立的人LSEC细胞株具有人原代LSEC的形态和主要功能特性,保留了对冷缺血再灌注损伤诱导凋亡的高度敏感性,因此可以作为体外研究肝脏缺血再灌注损伤机制的细胞材料。