大鼠糖原合成酶激酶3β过表达及糖原合成酶激酶3β抑制剂SB-216763对肝卵圆细胞增殖的影响

摘要

目的研究糖原合成酶激酶（GSK）3β过表达及GSK3β抑制剂SB-216763通过Wnt通路对大鼠肝卵圆细胞增殖的影响及其调控机制。方法肝卵圆细胞WBF-344分为空白对照组、GSK3β过表达慢病毒组（过表达组）、二甲基亚砜对照组和GSK3β抑制剂组,抑制剂组设1、5、10μmol/L 3个浓度梯度。以鉴定正确的GSK3β过表达慢病毒和不同浓度SB-216763处理WBF-344细胞,相差及荧光显微镜分别观察细胞形态及慢病毒组细胞荧光表达量;CCK8检测细胞增殖,Annexin V-碘化丙啶检测细胞凋亡;Western blot法检测GSK3β、β-catenin及cyelin D1蛋白表达。结果镜下见GSK3β过表达组细胞较少,老化明显,且出现大量绿色荧光;各抑制剂组细胞分裂旺盛,状态良好,且细胞数随SB-216763浓度升高而增多。CCK8及流式细胞术显示GSK3β过表达组细胞增殖减慢（t=7.178,P＜0.01）,凋亡明显,抑制剂组增殖加快（F=45.030,P＜0.01）。Western blot法显示过表达组GSK3β呈高表达趋势,β-catenin和cyclin D1表达减弱,抑制剂组GSK3β表达量无明显差别,但随抑制剂浓度增高,β-catenin和cyclin D1表达增强。结论 GSK3β过表达可下调Wnt通路使细胞增殖减慢,促进凋亡。GSK3β抑制剂能激活Wnt通路促进细胞增殖。