青蒿素诱导胆囊癌细胞的细胞周期阻滞和抑制细胞凋亡的体外实验研究

摘要

目的探讨青蒿素对胆囊癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法体外培养胆囊癌细胞株（GBC-SD和NOZ）。采用MTT法检测不同浓度青蒿素对两株细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测20 μmol/L青蒿素处理24 h对细胞周期的影响;通过FITC-Annexin V双染法检测20 μmol/L青蒿素处理24 h对细胞凋亡的影响;通过免疫印迹法检测20 μmol/L青蒿素处理24 h后p-ERK1/2、CDK4、cyclin D1、p16、cytochrome C、caspase-3在细胞内的表达水平变化。两组间比较采用t检验, 两组以上比较采用单因素方差分析。结果 WST-1实验结果显示, 青蒿素可以抑制GBC-SD和NOZ细胞增殖, 且该抑制作用具有浓度依赖性, 青蒿素对GBC-SD和NOZ细胞的半数抑制浓度分别为14.05 μmol/L和12.42 μmol/L。细胞周期分析结果显示, GBC-SD细胞[（74.60±2.24）%]和NOZ细胞[（78.86±2.02）%]G1期比例高于对照组[（54.26±1.61）%、（58.44±1.83）%]（F=0.658, P=0.000;F=0.055, P=0.000）。免疫印迹法检测结果显示, 青蒿素作用24 h后, 细胞周期调控相关蛋白CDK4和cyclin D1蛋白表达水平显著降低, 而p16蛋白表达水平显著增高（P值均＆0.05）。Annexin V/PI双染凋亡检测结果显示, GBC-SD细胞[（15.67±2.40）%]和NOZ细胞[（16.51±2.20）%]的凋亡比例高于对照组[（6.28±1.18）%、（6.94±1.23）%]（F=1.110, P=0.004;F=1.273, P=0.003）。免疫印迹法检测结果显示, 20 μmol/L青蒿素处理24 h后, 细胞色素C在线粒体中的含量显著降低, 而在胞质中的含量显著增高（P值均＆0.05）。结论青蒿素可能通过抑制ERK1/2信号转导通路干扰细胞增殖, 通过抑制CDK4和cyclin D1, 诱导p16表达造成G1期阻滞, 通过激活线粒体途径介导细胞凋亡。