细胞外基质磷酸化糖蛋白mRNA在人牙周韧带细胞成骨分化过程中的表达

摘要

目的检测人牙周韧带细胞（periodontal ligament stem cell,PDLC）诱导矿化过程中碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、骨钙素（osteocalcin,OCN）和细胞外基质磷酸化糖蛋白（matrixextracellular phosphoglycoprotein,MEPE）mRNA 的表达,探讨 MEPE 能否作为人牙周韧带细胞的分化标记及其功能。方法酶消化法培养 PDLC 并鉴定其来源,取未诱导及矿化诱导7、14和21 d 的PDLC,茜素红染色检测矿化结节的形成;免疫组织化学染色检测 OCN 的表达;实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测 ALP、OCN 和 MEPE mRNA 的表达变化,并对结果进行方差分析。结果PDLC 矿化诱导后茜素红染色显示钙化结节形成,免疫染色 OCN 表达增强;PDLC 成骨诱导培养前ALP、OCN 和 MEPE mRNA 表达系数分别为72、1.1和534。随着诱导时间延长,ALP、OCN 和 MEPEmRNA 表达上调,诱导7 d 组的表达系数分别为78、9.56和629.6,诱导14 d 组的表达系数分别为290、133和638.3,诱导21 d 组的表达系数分别为1108、925和2261.1。与对照组相比,各诱导组 OCNmRNA 的表达、诱导14 d 和21 d 组 ALP mRNA 的表达,以及诱导21 d 组 MEPE mRNA 的表达,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论在 PDLC 向成牙骨质或成骨样细胞分化过程中,MEPE mRNA 与ALP 和 OCN 呈现相似的表达变化趋势,提示 MEPE 与 PDLC 成骨分化有关,有可能作为 PDLC 向成牙骨质或成骨样细胞分化的标志。