应用单引物PCR获得以Bar基因为锚定基因的转基因水稻侧翼序列

摘要

确定外源基因在水稻基因组上的插入位置,是转基因水稻研究的重要内容之一.为了建立一种简单、快速、准确的获取外源基因在水稻基因组上插入位置侧翼序列的方法,结合前人TAIL-PCR引物设计的原则和经验,以转入水稻基因组中的Bar基因为锚定基因,设计了既能作为锚定引物又能作为随机引物使用的一系列单引物,应用这些单引物通过单引物PCR成功获得了外源基因在水稻基因组插入位点的侧翼序列.这种方法与目前较为常用的TAIL-PCR相比,简化了70％左右的试验步骤,节省了60％以上的试验时间,是一种简便、快捷的获得未知侧翼序列的方法.