TAK1赖氨酸158位点发生Lys63连接多聚泛素化在辐射诱导NF-κB激活过程中的作用

摘要

目的研究转化生长因子激酶1（TAK1）Lys63连接多聚泛素化在辐射导致的NF-κB激活过程中起到的作用及其作用位点。方法通过基因瞬时转染技术将FLAG-TAK1和HA-Ub-K63质粒共同转染至HEK-293T细胞,应用免疫沉淀和免疫印迹技术研究辐射对TAK1泛素化的影响;用稳定转染TAK1表达的HeLa细胞,证实辐射对TAK1泛素化的影响。通过免疫印迹技术,比较分析辐射对稳定转染TAK1 K158R的MEF细胞与TAK1野生型MEF细胞比较分析辐射对它表达IKKs、p38及JNK的影响,以证明辐射诱导的TAK1-Lys63多聚泛素化的位点是否在TAK1赖氨酸158位点。结果瞬时转染的HEK-293T细胞接受辐射后1h开始出现明显的TAK1泛素化表现,2h更明显。在稳定表达FLAG-TAK1的HeLa细胞系中得到证实。与TAK1野生型MEF细胞相比,TAK1 K158R突变的MEF细胞中辐射诱导的IKKs和p38磷酸化作用减低。结论 TAK1多聚泛素化在辐射导致的NF-κB激活过程中起到关键作用,辐射所致TAK1-Lys63连接多聚泛素化发生在TAK1的赖氨酸158位点。