盐诱导激酶2对放射损伤后细胞周期检查点中的调节作用

摘要

目的了解盐诱导激酶2（SIK2）在电离辐射诱发G2/M细胞周期阻滞中的作用,并探讨其作用机制。方法60Coγ射线照射HeLa细胞,慢病毒载体（pSicoR）构建SIK2的小干扰RNA（shRNA）表达载体,Lipofectamine 2000介导转染构建SIK2敲低表达细胞模型。Western blot检测SIK2的蛋白表达含量,流式细胞术检测细胞周期,磷酸化组蛋白3（pH3 Ser10）作为流式细胞检测分子标记物分析G2/M期检测点功能。结果γ射线照射能诱发HeLa细胞SIK2蛋白表达增加。成功构建shRNA敲低HeLa细胞SIK2表达的细胞模型,并通过该细胞模型观察到在不同剂量照射后（1、2、4、6 Gy）降低SIK2蛋白表达水平导致细胞的放射敏感性增高（t=-3.445、-2.581、-3.251、-2.553,P＜0.05）,γ射线诱发的细胞周期G2/M边界阻滞在照后5、6 h被提前解除（t=4.341、6.500,P＜0.05）。Western blot检测结果表明,SIK2敲低细胞与对照细胞相比,放射损伤诱发的磷酸化CHK2蛋白提前消退。结论 SIK2在细胞放射损伤反应中参与细胞的G2/M检查点功能的调节,影响细胞的放射敏感性。