敲低miR-221、miR-222表达对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究

摘要

目的探讨敲低miR-221、miR-222表达对MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性的影响及机制。方法脂质体介导共转染反义miR-221（AS-miR-221）与反义miR-222（AS-miR-222）寡聚核苷酸于MCF-7人乳腺癌细胞,采用Northern blotting方法鉴定转染后细胞miR-221、miR-222表达水平。流式细胞术和Caspase-3、Caspase-7活性检测AS-miR-221、AS-miR-222联合照射后细胞凋亡。成克隆实验计算细胞增殖性死亡的增敏比。生物信息学分析查询miR-221、miR-222成熟体序列和它们与放射敏感性有关的靶基因。Western blotting分析相关靶蛋白的表达变化。结果 Northern blotting显示AS-miR-221、AS-miR-222共转染组细胞miR-221、miR-222表达水平较对照组明显下降。AS-miR-221、AS-miR-222联合照射组细胞凋亡增多并增加细胞增殖性死亡,增敏比为1.87。生物信息学分析显示PTEN是miR-221、miR-222的靶基因且可提高放射敏感性。AS-miR-221、AS-miR-222共转染组细胞PTEN蛋白表达明显上调,pAkt蛋白表达下调。结论反义miR-221、AS-miR-222可能通过上调PTEN蛋白表达增强MCF-7人乳腺癌细胞放射敏感性。