基于重组P113蛋白的山羊抗绵羊肺炎支原体抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

摘要

绵羊肺炎支原体(MO)是引起绵羊、山羊等小反刍动物非典型肺炎的病原.为建立基于黏附素P113蛋白的检测MO抗体的间接ELISA方法,本研究采用原核表达并纯化的MO重组P113蛋白(rP113)作为包被抗原,经优化条件后建立了间接ELISA方法(rP113-ELISA),并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价.特异性试验结果显示该方法对MO之外的常见支原体和其他病原的抗体检测结果均为阴性,特异性较强.敏感性试验结果显示,1:3200稀释的阳性血清仍能检出,敏感性高.该方法重复性试验结果显示组内和组间变异系数均小于5％,重复性较好.利用rP113-ELISA和间接血凝方法(IHA)对MO疫苗免疫山羊的抗体和80份临床样品进行检测,结果显示检测MO疫苗免疫抗体的消长规律结果与IHA检测结果一致;对80份临床山羊血清样品检测结果与IHA检测结果阳性符合率为87.5％,阴性符合率为82.1％,rP113-ELISA敏感性高于IHA.本研究为MO抗体检测提供了一种特异、灵敏和稳定的方法.