G1-like与F/98-like进化谱系的PB2、M基因在H5N6亚型禽流感病毒重配中的竞争优势研究

摘要

cqvip:为评价不同H9N2亚型病毒供体在H5N6亚型禽流感病毒(AIV)重配中的作用,本研究选取全套内部基因与S基因型H9N2 AIV高度同源的3株H5N6 AIV流行株MZ34、YB0597和JT131,利用反向遗传学技术在MZ34的8基因重组质粒基础上另外添加F/98-like来源的PB2和M质粒,即以MZ34(8)+F/98(PB2+M)的10质粒组合(Group 1)共转染细胞进行重组H5N6病毒的竞争性拯救;PCR扩增经3轮空斑纯化后PCR扩增拯救病毒的PB2和M基因并测序鉴定。同时,为排除来源于同一母本病毒的8质粒易于自我组合包装的可能干扰,又将MZ34的PB2和M质粒替换为YB0597或JT131来源的质粒,构成另外的2种10质粒组合Group 2:MZ34(6)+YB0597(PB2+M)+F/98(PB2+M)和Group 3:MZ34(6)+YB0597(PB2)+JT131(M)+F/98(PB2+M),经共染获得拯救病毒,对其PB2和M基因PCR扩增后测序鉴定。结果显示,从Group1、Group 2和Group 3中拯救获得的重组H5N6病毒中PB2基因的构成情况S∶H分别为41∶23、48∶15以及37∶19,M基因的构成情况S∶H分别为40∶24、31∶32以及25∶31,而PB2和M基因的组合情况SS∶SH∶HS∶HH分别为27∶14∶13∶10、26∶22∶5∶10以及17∶20∶8∶11。表明相较于H型的F/98-like PB2与M基因,S型的G1-like PB2基因在各10质粒转染组的拯救的H5N6病毒重配中具有更显著的竞争优势,而G1-like M基因仅在Group 1组拯救的重组病毒中表现出优势,但G1-like PB2与M基因间的竞争优势叠加效应不明显。本研究为解析S基因型H9N2 AIV作为H7N9、H10N8等新型重组流感病毒内部基因供体的相关机制提供重要参考。