表达鸡传染性支气管炎病毒S基因的重组新城疫病毒构建

摘要

为构建以新城疫病毒(NDV)为活毒栽体表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S基因的重组病毒,本研究利用RT.PCR技术,以IBV的Massachusetts 41株RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到IBV S基因(3 534 bp),将其插入到NDV感染性克隆pBRN.FL中,构建了含有IBV S基因的重组NDV cDNA克隆pBRN-FL-IBVS.利用磷酸钙转染法,在辅助质粒pBS-NP、pBS-P和pBS-L的共同作用下,将pBRN-FL-IBVS转染表达T7聚合酶重组痘病毒感染的BSR细胞,救获重组NDV(rL-IBVS).采用RT-PCR检测接种重组病毒的鸡胚尿囊液,结果表明rL-IBVS中含有相应外源基因.IFA试验表明,rL-IBVS可与鸡抗IBV的高免血清发生特异性反应,证明S蛋白在感染的BSR细胞中得到表达.其鸡胚平均致死时间、脑内致病指数和静脉内致病指数等指标显示rL-IBVS保持了亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病力特性.本研究采用反向遗传操作技术构建了表达IBV S蛋白的重组NDV,为进一步研制IBV和NDV的重组基因工程活载体疫苗奠定了基础.