非结构蛋白1抗原捕获酶联免疫吸附法评价登革病毒抗体中和活性

摘要

目的在获得具有中和活性的针对Ⅰ型登革病毒（dengue virus serotypeⅠ,DENV-1）的抗体基础上,评价已建立的非结构蛋白1（nonstructural protein 1,NS1）抗原捕获酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）分析抗体中和活性的可行性,为中和抗体的筛选和疫苗效果的评价提供一个更为快速、简便的检测方法。方法使用重组DENV-1包膜蛋白Ⅲ区（envelopeprotein domainⅢ,EDⅢ）免疫5只BALB/c小鼠制备单克隆抗体（简称单抗）,采用间接ELISA、间接免疫荧光法（immunofluorescence assay,IFA）和免疫印迹法（Western Blot）对单抗进行筛选及鉴定;同时用该重组蛋白免疫1只新西兰兔,制备多克隆抗体血清;以传统噬斑减少中和试验（plaquereduction neutralization test,PRNT）作为参比方法 ,采用NS1抗原捕获ELISA对所获抗体进行中和活性检测。结果获得4株针对DENV-1 EDⅢ单抗和1份兔多抗血清,且被PRNT试验证明均具有中和活性,四株单抗腹水（1A1、1 B3、3D3、9D6）和兔多抗血清中和效价分别为1:1024、1:512、1:256、1:4096和1:4096。使用NS1抗原捕获ELISA法检测不到PRNT中和效价最低的3D3抗体对DENV-1有中和能力,而检测其余3株单抗（1A1、1B3、9D6）和多抗兔血清中和效价均远低于PRNT测定结果 ,分别为1:32、1:32、1:128和1:128。结论简单、快速的NS1抗原捕获ELISA可用于评价DENV抗体的中和活性,该方法适合于高效价中和抗体的筛选,有望成为评价疫苗效果的方法之一。