三种定量方法在温泉水中军团菌连续性监测中的应用

摘要

目的比较传统的平板培养法、荧光定量PCR和荧光染料叠氮溴化乙锭（ethidiummonoazide,EMA）结合荧光定量PCR的方法（EMA-荧光定量PCR）对温泉水中军团菌的检测效果。方法于2011年每月（除5月份）对北京市某温泉度假村的5个温泉池进行采样,每月采集11份水样,全年共采集121份。分别采用传统的平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法对水样中军团菌进行定性和定量分析。结果平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR检测温泉水中军团菌污染率分别为74.4%（90/121）、100.0%（121/121）和100.0%（121/121）;3种方法对121份温泉水样本中军团菌定量数值分别为0.10～216.00菌落形成单位（CFU）/ml、1.47～1557.75基因单位（GU）/ml和0.20～301.69 GU/ml。荧光定量PCR、EMA-荧光定量PCR和平板培养方法对121份温泉水每份军团菌含量检测的中位数（第25百分位数～第75百分位数）分别为75.30（32.51～192.10）GU/ml、36.46（16.08～91.21）GU/ml和5.30（0.00～33.70）CFU/ml。对于121份温泉水水样,3种方法对军团菌含量分析的定量数值差异有统计学意义（χ~2=187.900,P＜0.01）,其中荧光定量PCR的定量数值最高,EMA-荧光定量PCR的数值次之,平板培养的数值最低。结论荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法检测温泉水中军团菌的灵敏度优于传统的培养方法,EMA-荧光定量PCR方法适合用于环境水体中军团菌活菌监测。