SMU-X通过Mfn2/JNK通路发挥抗炎作用对抗实验性自身免疫性脑脊髓炎疾病进程发展

摘要

目的SMU-X是治疗多发性硬化的潜在药物,但SMU-X的作用靶点较多,其治疗多发性硬化的具体机制还未明确。线粒体融合蛋白2(Mfn2)是一种线粒体外膜GTP酶,调节线粒体融合,影响内质网与线粒体的相互作用,并且被认为密切参与炎症小体的形成。本研究旨在确定SMU-X对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗作用是否与Mfn2有关。方法在BV2小胶质细胞系上构建脂多糖(LPS)刺激模型。采用Western印迹法观察炎症相关蛋白(iNOS和COX-2)变化,ELISA法检测炎症因子(IL-6和TNF-α)水平以及线粒体氧化应激的变化。Western印迹法观察Mfn2蛋白水平、炎症通路蛋白(p38 MAPK和JNK)磷酸化水平的变化。用C57小鼠构建EAE模型,进行临床评分,通过Western印迹法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达,采用HE染色和Western印迹法观察脊髓组织炎症细胞浸润及小胶质细胞激活相关蛋白的表达。结果①LPS处理后,BV2细胞激活,炎症因子IL-6和TNF-α及炎症相关蛋白iNOS和COX2显著上调,而给予SMU-X可逆转LPS诱导的BV2细胞激活以及炎症因子和蛋白上调。②LPS处理BV2细胞后,线粒体膜电位降低,超氧阴离子活性氧的生成明显上调,线粒体氧化应激水平上升,而给予SMU-X后可以改善线粒体氧化应激水平。③LPS处理BV2细胞后,Mfn2表达下调,P38和JNK磷酸化水平明显增加,给予SMU-X后可以逆转Mfn2的下调及P38和JNK磷酸化水平的增高。④敲低Mfn2可对抗SMU-X对LPS诱导的BV2细胞的抗炎保护作用。⑤敲低Mfn2可对抗SMU-X对BV2线粒体氧化应激水平的降低作用。⑥敲低Mfn2可对抗SMU-X对LPS诱导的BV2细胞的JNK通路的抑制作用。⑦SMU-X可降低EAE小鼠的临床评分及脊髓白质区炎症细胞浸润,增加脊髓组织结构蛋白MBP的表达。⑧EAE小鼠发病后,小胶质细胞激活标志物Iba1和炎症相关蛋白COX-2的表达明显上调,而给予SMU-X后可以改善这一现象。⑨EAE小鼠发病后,小鼠脊髓白质区Mfn2的表达明显降低,CD11b的表达明显升高,给予SMU-X后可以明显逆转这些变化。结论SMU-X可通过Mfn2/JNK通路发挥抗炎作用,从而对抗EAE小鼠疾病进程的发展。