天麻活性成分20C对6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞损伤及帕金森病模型小鼠的保护作用

摘要

目的 研究天麻活性成分20C对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞损伤及帕金森病(PD)模型小鼠的保护作用.方法 ①用6-OHDA 100μmol·L-1单独(模型组)或与20C 0.01,0.10和1.00μmol·L-1共同(模型+20C组)孵育PC12细胞6 h,采用MTT法检测细胞存活率;用6-OHDA 100μmol·L-1和20C 1.00μmol·L-1共同孵育PC12细胞6 h,采用免疫荧光染色法检测细胞DNA和RNA氧化损伤.②C57BL/6小鼠分为正常对照组、模型组、模型+左旋多巴(L-dopa)组和模型+20C组.采用单侧纹状体双位点注射6-OHDA方法制备PD小鼠模型,造模3周后,模型+L-dopa组和模型+20C组小鼠开始ig给予20C 100 mg·L-1或L-dopa 40 mg·g-1,连续给药4周后,采用免疫组化法观察小鼠纹状体和黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达;Western印迹法检测黑质TH表达水平;透射电镜观察小鼠黑质神经元超微结构.结果 ①与细胞对照组比较,模型组PC12细胞存活率显著下降(P<0.01),细胞DNA/RNA氧化损伤明显增加(P<0.01);与模型组比较,模型+20C 0.10和1.00μmol·L-1组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),模型+20C 1.00μmol·L-1组细胞DNA和RNA氧化损伤明显降低(P<0.05).②与正常对照组相比,模型组小鼠纹状体和黑质区TH阳性染色区域减少,黑质区TH蛋白表达水平显著减少(P<0.01),黑质区神经元核膜皱缩,电子密度增加,细胞周围肿胀;与模型组相比,模型+20C 100 mg·kg-1组纹状体和黑质区TH阳性染色区域增加,黑质区TH蛋白表达显著增加(P<0.05),神经元核膜皱缩及细胞周围肿胀程度减轻.结论 20C能够降低6-OHDA诱导的PC12细胞死亡率,并减轻6-OHDA诱导的PD模型小鼠黑质和纹状体病理损伤.