三氯乙烯诱导人L-02肝细胞适应性反应的差异蛋白质组学分析

摘要

目的 研究三氯乙烯(TCE)诱导L-02肝细胞的适应性反应及蛋白质表达改变.方法 利用噻唑蓝(MTT)比色法,以0.5%二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂对照组,确定对细胞增殖无明显作用的1 μmol·L-1 TCE作为TCE诱导L-02肝细胞适应性反应的预刺激浓度,预刺激时间12 h,预刺激后再刺激浓度(适应组)为30 μmol·L-1 TCE,刺激时间24 h.然后选取0, 1,30和1+30 μmol·L-1 TCE(1 μmol·L-1 TCE预刺激12 h后,再次接受30 μmol·L-1 TCE刺激24 h)4组平行进行双向凝胶电泳分离细胞总蛋白,银染显色,图像分析后,挑选差异蛋白进行基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱鉴定.结果 1 μmol·L-1 TCE预刺激L-02肝细胞后,能降低30 μmol·L-1 TCE攻击产生的细胞毒性.与单独用30 μmol·L-1 TCE攻击相比,细胞增殖能力增加明显,细胞死亡减少.分析比较4组二维电泳图谱, 发现15个蛋白质斑点表达发生改变,对其中5个差异较明显的蛋白点进行质谱分析鉴定,分别为Ku 86自体抗原相关蛋白1、透明质酸蛋白(hyaluronan)介导细胞运动受体、谷胱甘肽转移酶ω1、白细胞弹性蛋白酶抑制剂和空泡ATP合酶亚单位B.结论 TCE可诱导L-02肝细胞产生适应性反应,引起L-02肝细胞蛋白表达改变,差异蛋白大多参与机体保护.