吡格列酮对脂多糖引起大鼠大脑皮质神经元损伤的抑制作用

摘要

目的 探讨吡格列酮对脂多糖 (LPS) 引起的神经元损伤的抑制作用,并探讨其信号传导机制.方法 取培养7 d的大鼠大脑皮质神经元细胞,除正常对照组外,其余各组先给予相应的处理30 min～1 h后,再加LPS 10 mg·L~(-1)处理4～24 h.MTT法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;免疫荧光染色法测定磷酸化c-Jun氨基端激酶1(JNK1)细胞内定位;Western蛋白印迹法检测活性胱天蛋白酶3(caspase 3)蛋白表达和磷酸化JNK1水平;Griess法测定细胞培养上清液中一氧化氮(NO) 含量.结果 与对照组相比,LPS可使体外培养神经元细胞存活率明显下降,(100.0±10.9)% vs (72.3±2.1)%;凋亡细胞百分率明显增加,(11.5±4.2)% vs (39.5±8.2)%;活性caspase 3蛋白表达和磷酸化JNK1水平增加;细胞培养上清液中NO 含量明显增加.吡格列酮0.01, 0.1和1 μmol·L~(-1)可明显对抗LPS引起的培养神经元细胞存活率下降,并呈一定浓度依赖性.吡格列酮0.1和1 μmol·L~(-1)也可明显对抗LPS引起的培养神经元凋亡细胞百分率、活性caspase 3蛋白表达、磷酸化JNK1水平和NO 含量增加.LPS+吡格列酮(1 μmol·L~(-1))组,细胞存活率为(97.8±9.7)%,凋亡细胞百分率为(20.6±5.0)%,NO 含量为(6.8±1.3)μmol·L~(-1).过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662不能去除吡格列酮对LPS引起的神经元细胞损伤的抑制作用,在LPS+吡格列酮(1 μmol·L~(-1))+GW9662(10 μmol·L~(-1))组,细胞存活率为(90.7±6.9)%,凋亡细胞百分率为(23.4±4.1)%, NO含量为(5.8±0.7)μmol·L~(-1).GW9662 10 μmol·L~(-1)对 LPS引起的细胞存活率降低没有影响.与LPS组相比,JNK特异性阻断剂SP600125 5 μmol·L~(-1)可明显对抗LPS引起的神经元损伤,细胞存活率明显增加,(72.3±2.1)% vs (109.8±11.8)%;凋亡细胞百分率降低,(39.5±8.2)% vs (19.1±4.8)%;NO含量降低,(21.1±5.0)μmol·L~(-1) vs (4.0±1.3)μmol·L~(-1).结论 吡格列酮能明显抑制LPS引起的皮质神经元损伤,这种作用可能与抑制JNK信号传导通路有关,与PPARγ激活无关.