新型孕激素衍生物3α-羟基-3β-甲氧基甲基-16,17-亚甲基-孕甾-20-酮对硝普钠损伤PC12细胞的保护作用

摘要

目的 探讨新型孕激素衍生物3α-羟基-3β-甲氧基甲基-16,17-亚甲基-孕甾-20-酮(CPU)对硝普钠(SNP)诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用及其机制.方法 用终浓度为0.01,0.10,1.00 μmol· L-1的CPU预处理30 min,然后加入SNP共同作用24 h.采用MTT法检测细胞存活率,分光光度计法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化;流式细胞仪检测活性氧(ROS)、线粒体膜电位和细胞凋亡率;Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平.结果 与细胞对照组比较,SNP模型组PC12细胞的存活率显著降低,LDH的释放明显增加(P＜0.01),MDA生成增多,SOD活性降低,ROS水平升高,线粒体膜电位水平降低,细胞凋亡率由细胞对照组(1.20±0.14)％增加至(55.52±3.56)％(P＜0.01);Bcl-2蛋白表达降低,而Bax表达升高,Bax/Bcl-2比值升高,同时胱天蛋白酶3被激活(P＜0.01).与模型组比较,CPU 0.01,0.10和1.00μmol·L-1作用24 h后,细胞存活率显著升高,LDH的释放减少(P＜0.01),MDA的生成量减少,SOD活性增加,ROS累积减少,线粒体膜电位水平升高(P＜0.01);凋亡细胞分别降至(37.79±4.85)％,(22.31±4.25)％和(10.39±2.65)％;Bcl-2蛋白表达增加,Bax和活化的胱天蛋白酶3表达降低.结论 CPU对SNP所致损伤的PC12细胞有一定的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化和抗凋亡作用有关.