曲尼司特对环孢素A诱导的人肾小管上皮细胞向间充质转变的抑制作用

摘要

目的研究曲尼司特（Tran）对环孢素A（CsA）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）向间充质转变的影响,并探讨该药抗纤维化的机制。方法所有用于实验的HK-2细胞株均为8～12代细胞,分为4组:（1）空白对照组,收获细胞,不做任何处理;（2）CsA组,加入4.2μmol/L CsA;（3）CsA+Tran组,预先加入100μmol/L Tran,作用2 h后再加入4.2μmol/L CsA;（4）Tran组,仅加入100μmol/L Tran。72 h后于共聚焦显微镜下观察各组细胞形态学变化;用免疫荧光法以及免疫印迹法检测各组钙黏蛋白（E-cadherin）、平滑肌肌动蛋白α（α-SMA）和骨桥蛋白（OPN）的表达。结果 HK-2细胞在正常情况下表现为典型的"鹅卵石"样形态,细胞圆钝,且与邻近的细胞连接较为紧密;空白对照组和Tran组细胞表现为典型的HK-2细胞形态;CsA组细胞变狭长,甚至向周边伸出"伪足"样改变,细胞间连接较为稀疏;CsA+Tran组的细胞形态学改变有明显改善。CsA组细胞E-cadherin荧光表达强度明显弱于对照组,α-SMA、OPN荧光表达强于对照组;CsA+Tran组细胞E-cadherin荧光表达强于CsA组,α-SMA、OPN荧光表达弱于CsA组。免疫印迹检查中,CsA组细胞E-cadherin的表达明显低于对照组,而α-SMA、OPN的表达明显高于对照组,CsA+Tran组细胞E-cadherin的表达高于CsA组,而α-SMA、OPN的表达低于CsA组。结论曲尼司特能抑制CsA诱导的HK-2细胞由肾小管上皮向间充质细胞转化的过程,其机制可能与抑制OPN的表达有关。