人突变Lumican转基因小鼠角膜组织中小分子亮氨酸蛋白聚糖成员表达改变的研究

摘要

目的探讨人突变Lumican转基因小鼠角膜组织中小分子亮氨酸蛋白聚糖（SLRP）成员mRNA水平表达变化。方法实验研究。选取10只（雌雄各5只）人突变Lumican转基因小鼠作为实验组, 选取10只（雌雄各5只）同周龄野生型C57BL/6J小鼠作为对照组。转基因小鼠Lumican基因突变位点为cDNA 569T＆C, 使第199位氨基酸由亮氨酸突变为脯氨酸（L99P）。8周龄时脱颈法处死入组小鼠, 摘取双侧眼球后获得双眼角膜组织, 采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-Q-PCR）技术分别检测两组小鼠角膜组织中Lumican、Decorin、Biglycan、Keratocan、Fibromodulin基因在mRNA水平的表达。采用两独立样本均数t检验对两组小鼠基因表达差异进行统计学分析, 差异以倍数变化法表示。结果实验组转基因小鼠角膜组织中Lumican基因mRNA表达升高, 是对照组野生型小鼠的1.497倍, 差异具有统计学意义（t=4.34, P＆0.05）。实验组小鼠角膜组织中Keratocan基因mRNA表达降低, 是对照组的0.323倍, 差异具有统计学意义（t=-95.94, P＆0.05）。实验组中Decorin基因mRNA表达降低, 是对照组的0.648倍, 差异均具有统计学意义（t=-9.98, P＆0.05）。实验组较对照组Biglycan基因mRNA表达降低, 是对照组的0.522倍（t=-7.74, P＆0.05）, Fibromodulin基因mRNA表达升高, 是对照组的1.193倍, 差异无统计学意义（t=1.66, P＆0.05）。结论人突变Lumican转基因小鼠与野生小鼠相比, 角膜组织中SLRP成员mRNA水平表达发生改变, 提示Lumican基因突变（cDNA 569T＆C）可能导致该基因结构破坏, 调控角膜组织中其他SLRP成员基因表达的功能受损。此外, 该基因位点的突变导致Lumican核心蛋白中第199位氨基酸由亮氨酸突变为脯氨酸（L199P）, 提示Lumican基因突变可能阻碍了Lumican与胶原蛋白分子结合, 进而影响了SLRP成员的表达。（中华眼科杂志, 2018, 54:911-917）