RNA干扰技术体外抑制低氧诱导因子-1α及血管内皮细胞生长因子表达的研究

摘要

目的研究正常氧及低氧环境下,pSUPERH1-siHIF-1α真核表达载体对低氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的抑制效果及由此引起的血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的差异。方法构建pSUPERH1-siHIF-1α真核表达载体,并建立 pSUPERH1-siHIF-1α稳定转染细胞系。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法,筛选 HIF-1α mRNA 抑制效率最高的细胞系。然后将其与对照细胞在正常氧（20%O2）及低氧环境（1%O2）下培养,采用半定量 RT-PCR、免疫印迹法及 ELISA 技术检测正常氧及低氧环境下 pSUPERH1-siHIF-1α对 HIF-1α及 VEGF 表达的抑制效果。结果低氧环境下,pSUPERH1-siHIF-1α可明显抑制 HIF-1α和 VEGF mRNA 及蛋白质的表达。而正常氧环境下,pSUPERH1-siHIF-1α虽可明显下调 HIF-1α mRNA 表达水平,但对 VEGF mRNA 和分泌型蛋白表达水平无明显抑制效果。结论低氧环境下,pSUPERH1-siHIF-1α能显著抑制 HIF-1α的表达,且下调其下游基因VEGF 的表达。因此,pSUPERH1-siHIF-1α可能为视网膜新生血管的基因治疗提供新的途径。（中华眼科杂志,2007,43:1028-1035）