转染Smad7基因的人眼球筋膜囊成纤维细胞I型胶原蛋白及纤维连结蛋白表达的改变

摘要

目的观察转染 Smad7基因的人眼球筋膜囊成纤维细胞（HTFs）Ⅰ型胶原蛋白和纤维连结蛋白表达的改变。方法用 NucleofectorTM核酸转染仪将含有 Smad7的真核表达质粒转染至HTFs。采用实时定量逆转录聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原蛋白及纤维连结蛋白 mRNA 表达的改变。采用放射免疫法检测Ⅰ型前胶原羧端肽原（PICP）在培养液中浓度的改变,检测经转化生长因子β2（TGF-β2,10 ng/ml）作用后以上指标的改变。以未转染 HTFs 和转染空质粒的 HTFs 作为对照。结果成功将含有 Smad7基因的质粒转染至 HTFs,并证明其 Smad7基因 mRNA 表达明显升高。转染 Smad7的 HTFs Ⅰ型胶原蛋白 mRNA 表达率为（89.53±9.37）%,分别是对照组 HTFs 的40.47%和 pCMV5-HTFs 的37.94%。培养液中 PICP 浓度为（15.29±2.18）μg/L,分别是对照组 HTFs 的52.10%和pCMV5-HTFs 的57.35%。转染 Smad7的 HTFs 能够明显拮抗由 TGF-β2作用引起的Ⅰ型胶原蛋白mRNA 表达和 PICP 浓度升高（P＜0.01）;无论是否有 TGF-β2作用,转染 Smad7的 HTFs 纤维连结蛋白 mRNA 的表达与对照组相比,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 Smad7能降低 HTFs Ⅰ型胶原蛋白 mRNA 表达和Ⅰ型胶原蛋白的合成,但对纤维连结蛋白 mRNA 表达无明显作用。（中华眼科杂志,2007,43:124-128）