羊膜为载体的人角膜缘上皮细胞移植治疗大鼠角膜碱烧伤的研究

摘要

目的研究人角膜缘上皮细胞的生物学特性,探讨体外培养的人角膜缘上皮细胞移植进行眼表重建的临床应用价值及前景。方法体外培养人角膜缘上皮细胞,通过免疫荧光染色法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法分析表型,BrdU 掺入法检测慢周期（slow-cycling）细胞。建立大鼠角膜碱烧伤模型,随机分为单纯对照组、羊膜移植（AMT）组及羊膜为载体的角膜缘上皮细胞移植（LSAT）组,术后通过裂隙灯显微镜观察、角膜切片 HE 染色及免疫荧光染色等方法对各组大鼠眼表恢复情况进行评价。结果培养早期大多数角膜缘上皮细胞 p63和 K19染色阳性,仅少数细胞 K3染色阳性;随培养时间的延长,K3阳性细胞增多,部分细胞同时表达 p63和 K3。RT-PCR 示培养的角膜缘上皮细胞中 p63和 K12均有阳性表达,而角膜上皮细胞仅表达 K12。BrdU 掺入法检测到慢周期细胞。动物实验表明,LSAT 可以显著减轻角膜病变,使角膜恢复完整性和透明性,眼表评分各项指标与AMT 组和对照组比较差异均有统计学意义。LSAT 组大鼠角膜切片染色示大部分上皮细胞抗人核和K3染色阳性。结论体外培养的人角膜缘上皮细胞中 p63不仅表达于角膜缘干细胞,在短暂扩充细胞中也有一定量的表达;慢周期细胞的存在证实了培养的角膜缘上皮细胞中角膜缘干细胞的存在,p63和 K19阳性、K3阴性的细胞为角膜缘干细胞;羊膜为载体的体外培养的人角膜缘上皮细胞移植可有效重建眼表,具有较高的临床应用价值与发展前景。（中华眼科杂志,2007,43:134-141）