转甲状腺素蛋白对RPE细胞及视网膜微血管内皮细胞生物学行为的影响

摘要

目的观察转甲状腺素蛋白（TTR）对视网膜色素上皮细胞（RPEC）增生及视网膜微血管内皮细胞（RMVEC）增生、迁移的影响并考察其与VEGF mRNA表达的关系, 方法通过加入外源性TTR考察TTR对RPEC增生的影响;利用小干扰RNA （siRNA）沉默视网膜色素上皮自身表达的TTR, 使用Western blot检测沉默效果;RT-PCR法考察沉默后VEGF mRNA的变化;通过transwell共培养体系, 观察TTR沉默前后RMVEC增生、迁移行为的改变。两组间比较行t检验, 三组间两两比较用SNK法。结果 MTT比色法显示, 4 μmol/L组吸光度（A）值（0.36±0.01）低于0 μmol/L组A值（0.72± 0.02）, 差异有统计学意义（t=18.08 , P＆0.0001）, TTR对RPEC的增生有抑制作用;Western blot法检测TTR的表达抑制, 实验组与对照组间差异有统计学意义（P＆0.05）, TTR的表达被有效沉默;沉默TTR表达后检测VEGF mRNA表达, 空白对照组、阴性对照组、实验组3个组间两两比较, 差异均无统计学意义（P＆0.05）, TTR的沉默表达并未在mRNA水平上引起VEGF的表达改变;48 h RPEC-RMVEC共培养细胞增生实验结果显示, RMVEC增生数NC siRNA组[（362.8±17.7）个]和TTR siRNA组[（252.4± 13.92）个]间差异有统计学意义（t=4.901, P=0.0012）, 沉默TTR表达会抑制RMVEC的增生能力。48 h RPEC-RMVEC共培养细胞迁移实验结果显示, RMVEC向外迁移数NC siRNA组[（229.0±14.9）个]和TTR siRNA组[（147.8±12.2）个]比较, 差异有统计学意义（t=4.213 , P=0.0029 ）。沉默TTR表达会抑制RMVEC的迁移能力。结论 TTR能抑制RPEC增生、促进RMVEC增生和迁移, 这一现象并非通过VEGF实现, 其机制值得进一步研究。（中华眼科杂志, 2016, 52:856-860）