c-myc和K-ras对小鼠卵巢上皮细胞体外转化和体内致瘤的研究

摘要

目的探讨癌基因c-myc和K-ras在卵巢癌发生发展中的作用。方法用逆转录病毒转基因系统,将正常的c-myc基因和突变的K-ras基因先后导入小鼠卵巢上皮（MOSE）细胞,建立表达c-myc和K-ras基因的细胞株,分别称为MOSE-Myc细胞、MOSE-Ras细胞和MOSE-RM细胞。通过细胞增殖实验、克隆形成实验、体外侵袭实验以及体内成瘤实验,研究转基因后MOSE细胞生物学特性的改变及恶性转化。结果c-myc和K-ras基因容易被重组逆转录病毒导入MOSE细胞,转导后靶细胞内分别有相应的c-myc或K-ras mRNA转录,以及相应的c-myc（62 000）和K-ras（21 000）蛋白的表达。MOSE-Ras组和MOSE-RM（MOSE-Ras／Myc）组细胞增殖能力显著强于MOSE和MOSE-Myc组（P＜0．01）,MOSE-RM组细胞增殖能力显著强于MOSE-Myc组（P＜0．05）。MOSE-Ras和MOSE-RM组在软琼脂培养中均能形成克隆集落,而MOSE组和MOSE-Myc组不能形成克隆集落。MOSE-Ras组和MOSE-RM组能够穿透Matrigel,具有侵袭能力。MOSE-Ras组和MOSE-RM组细胞在裸鼠体内形成肿瘤,且肿瘤组织细胞仍然可见有K-ras和c-myc蛋白的表达;而MOSE组和MOSE-Myc组无肿瘤形成。结论重组逆转录病毒载体作为转基因的工具,转导效率高,可稳定表达,可以感染正常的细胞;突变的K-ras可使MOSE发生恶性转化,在体内形成肿瘤;c-myc作为一个核转录调节因子,不能使MOSE发生恶性转化,但可协同其他因子,加强其他因子的功能。