表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478通过叉头转录因子O3a对非小细胞肺癌细胞中叉头转录因子M1表达的影响

摘要

目的探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478对非小细胞肺癌细胞中叉头转录因子M1（FOXM1）、叉头转录因子O3a（FOXO3a）的表达调控,以及RNA干扰技术下调FOXM1、FOXO3a的表达后对肺癌细胞增殖及其对AG1478药物敏感性的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法检测肺腺癌细胞株A549中FOXM1和FOXO3a mRNA和蛋白的表达情况;瞬时转染FOXM1和FOXO3a小干扰RNA（siRNA）后,RT-PCR和Western blot法检测转染效率和相关蛋白的表达;采用CCK-8法、集落形成实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、集落形成能力及细胞周期分布的改变。结果 AG1478呈时间依赖性抑制FOXM1 mRNA和蛋白的表达（均P＜0.05）。转染FOXM1 siRNA后,FOXM1 mRNA和蛋白及其细胞周期蛋白B1（cyclin B1）、c-Myc、Bcl-2蛋白的表达明显下降,p21和剪切后多腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved-PARP）蛋白的表达则明显上调（均P＜0.05）。空白组、阴性对照组和FOXM1 siRNA转染组的集落数分别为（135.3±7.0）个、（125.3±7.5）个和（37.3±8.6）个,阴性对照组和FOXM1 siRNA转染组的集落形成抑制率分别为（7.40±0.94）%和（72.40±6.09）%（P＜0.05）。FOXM1 siRNA转染组的G2/M期细胞比例为（55.60±4.83）%,明显高于空白组[（24.30±1.95）%]和阴性对照组[（21.30±2.06）%,P＜0.05]。转染FOXM1 siRNA后,可明显增加A549细胞对AG1478的药物敏感性（P＜0.05）。AG1478可诱导活化的FOXO3a分子表达并促进其核定位;转染FOXO3a siRNA后,FOXM1蛋白水平明显上调,并通过活化的AKT削弱AG1478对FOXM1表达的抑制。结论 AG1478通过诱导活化的FOXO3a表达及胞核重定位,下调FOXM1的表达,进而抑制肺癌细胞增殖,增加肺癌细胞对AG1478的敏感性。