丁基苯酞对过氧化氢诱导下视网膜Müller细胞凋亡的影响

摘要

目的观察丁基苯酞（NBP）对过氧化氢（H2O2）诱导下视网膜Müller细胞凋亡的保护作用。方法体外培养的人视网膜Müller细胞分为正常对照组、模型组（H2O2组）、实验组（H2O2+NBP组）。H2O2组、H2O2+NBP组细胞培养液中加入200μmol/L H2O2刺激2 h后,H2O2组更换为完全培养基,H2O2+NBP组更换为含1μmol/L NBP的完全培养基。正常对照组为常规培养细胞。苏木精-伊红（HE）染色观察各组细胞形态改变;噻唑蓝（MTT）比色法检测NBP作用24、48h后各组细胞活性;Hoechst33258染色观察各组细胞凋亡情况;LIVE/DEAD～?细胞活性/细胞毒性试剂盒检测各组细胞生存力;二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）+内质网（ER）红色荧光探针（ER-Tracker Red）双染色观察各组细胞ER中活性氧（ROS）的表达水平。单因素方差分析联合Dunnett统计学方法进行数据分析。结果 HE染色结果显示,H2O2+NBP组细胞数量较H2O2组增加。MTT比色法检测结果发现,NBP作用24、48h后,正常对照组与H2O2组、H2O2组与H2O2+NBP组细胞生存力比较,差异均有统计学意义（t=28.96、3.658、47.58、20.33, P＜0.001、0.022）。Hoechst33258结果显示,H2O2+NBP组细胞少数细胞核边集呈新月状且细胞核碎裂减少,其余细胞蓝色荧光均匀。LIVE/DEAD细胞活性/细胞毒性试剂盒检测结果显示,H2O2组中呈红色荧光的死亡细胞明显增多,呈绿色荧光的活细胞数量显著减少;H2O2+NBP组呈绿色荧光的活细胞数量增多,呈红色荧光的死亡细胞减少。DCFH-DA+ER-Tracker Red双染色结果显示,H2O2组细胞中绿色荧光强度明显增强;H2O2+NBP组细胞中绿色荧光强度较H2O2组明显降低。结论 NBP通过抑制ROS的产生缓解H2O2诱导的人视网膜Müller细胞凋亡。