绿色荧光蛋白标记的脉络膜恶性黑色素瘤原位移植瘤模型

摘要

目的建立新型裸鼠脉络膜恶性黑色素瘤原位移植瘤模型. 方法利用脂质体将绿色荧光蛋白(GFP)真核表达质粒pEGFP-N1转入人脉络膜恶性黑色素瘤细胞(OCM-1),新霉素、荧光显微镜及流式细胞仪筛选稳定表达GFP的细胞克隆.将2μl细胞浓度为4.5×107～5.5×107个/ml的细胞悬液注射到麻醉后的40只裸鼠右眼视网膜下间隙,左眼不注射作为对照眼.手术后利用带荧光的体视显微镜连续观察肿瘤生长情况,分别于肿瘤生长的眼内期、眼外期及衰竭期处死动物,荧光显微镜观察裸鼠视神经、颅底、肺、肝、肾的肿瘤转移情况,并行肿瘤组织的GFP免疫组织化学染色. 结果手术后10～12 d肿瘤开始生长,血管扩张、扭曲,新生血管形成;手术后20～22 d肿瘤占满玻璃体腔;手术后24～26 d肿瘤生长至眼外;眼外期后,迅速进入衰竭期,衰竭期嗅球、肾、肺、肝脏有转移灶.移植瘤病理组织学表现类似于人脉络膜恶性黑色素瘤;免疫组织化学染色肿瘤细胞GFP染色阳性. 结论以GFP基因标记的OCM-1经裸鼠视网膜下间隙移植建立的脉络膜恶性黑色素瘤原位移植瘤模型,为研究自然状态下肿瘤的生长和转移提供了一个新的方法.