细胞因子对培养的人视网膜色素上皮细胞早期生长反应基因-1的影响

摘要

目的检测细胞因子对人视网膜色素上皮（RPE）细胞早期生长反应基因-1（Egr-1）的影响。方法体外培养人RPE细胞,采用免疫荧光染色、Western blotting和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）定性定量观察不同刺激因素作用下Egr-1蛋白和mRNA的表达变化。刺激因素包括:20μg/ml脂多糖（LPS）、40ng/ml肿瘤坏死因子（TNF）-α、10U/ml干扰素（IFN）-γ、30%单核/巨噬细胞株（THP-1细胞）上清液和正常人玻璃体液分别刺激0（未受刺激）、10、20、30、40、60min。结果在未受刺激的RPE细胞中Egr-1呈弱阳性表达,细胞浆为浅黄绿色荧光,随着刺激因素的作用,Egr-1的表达明显增强,细胞浆和部分细胞核呈强绿色荧光。20μg/mlLPS、40ng/mlTNF-α、10U/mlIFN-γ、30%THP-1细胞上清液和玻璃体液刺激RPE细胞后,与未受刺激的RPE细胞相比,Egr-1mRNA的最大增强幅度分别为1.9、1.3、1.4、1.2、1.4倍,Egr-1蛋白的最大升高幅度分别为3.4、1.2、1.7、3.2、1.3倍。结论LPS、TNF-α、IFN-γ、THP-1细胞上清液和玻璃体液可上调体外培养的人RPE细胞Egr-1mRNA和蛋白的表达,且出现核转位现象,说明这些刺激因素可引起Egr-1的活化。