银杏叶提取物对幼年大鼠大视网膜神经节细胞保护作用的研究

摘要

目的观察银杏叶提取物（EGb761）对培养幼年大鼠大视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用;建立用荧光金逆行上丘标记鉴定体外培养大鼠RGC的方法。方法12只鼠龄20dSprague-Dawley大鼠用荧光金行双侧上丘注射,标记RGC。6d后摘除眼球,其中一只眼球行视网膜铺片,荧光显微镜下观察标记情况。另一只眼球摘除后分离视网膜,制成细胞悬液,倒置荧光显微镜下观察荧光着染的RGC形态。将细胞悬液分为对照组及浓度分别为0.03%、0.10%、0.30%、1.00%、3.00%的EGb761组,接种后3h,1、3、5、7d锥虫蓝染料排斥法检测RGC的存活情况,同时记录细胞存活率。结果逆行上丘标记后观察到RGC标记良好,视网膜细胞悬液中大RGC特征明显,离体后迅速死亡,荧光消失。锥虫蓝染料排斥法观察到在视网膜细胞悬液中,这种大RGC死亡迅速。加入不同浓度的EGb761后大RGC存活率明显增加,不同时间点与对照组比较大RGC存活率均有统计学意义（P＜0.01）,且呈明显剂量依赖关系（P＜0.01）。结论EGb761对体外培养的RGC具有明显的保护作用;荧光金逆行上丘标记鉴定体外培养的RGC方法可行。