重组腺病毒-p21抑制猴视网膜微血管内皮细胞增生的作用研究

摘要

目的观察重组腺病毒-p21（rAd-p21）对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞（RF/6A）增生的作用。方法体外培养RF/6A细胞系,分为磷酸盐缓冲液（PBS）组、rAd-p21转染组及阴性对照组,并转入相应的质粒表达载体。应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法及蛋白免疫印迹（Westernblot）检测p21mRNA及蛋白在RF/6A细胞中的表达;应用流式细胞仪检测p21基因对RF/6A细胞周期的影响;行内皮细胞体外成管实验观察p21基因对RF/6A细胞成管的抑制作用。结果 rAd-p21转染组p21mRNA及蛋白表达显著增高。细胞周期检测结果显示,PBS组、rAd-p21转染组、阴性对照组G0/G1期细胞百分比分别为（40.76±6.66）%、（67.45±11.61）%、（41.55±8.99）%;rAd-p21转染组RF/6A细胞出现G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增多。rAd-p21转染组与PBS组和阴性对照组比较,差异有统计学意义（F=21.284,P=0.000）。体外成管实验显示,PBS组、rAd-p21转染组、阴性对照组每一视野下内皮细胞成管数分别为（8.25±3.19）、（3.86±1.21）、（7.62±2.69）个;rAd-p21转染组与PBS组和阴性对照组比较,差异有统计学意义（F=7.138,P=0.004）。结论 rAd-p21可成功转染RF/6A细胞并稳定表达p21mRNA及蛋白,并可显著抑制其增生。