α-硫辛酸对高压条件下培养大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

摘要

目的观察α-硫辛酸对高压条件下培养大鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用。方法将RGC分为正常对照组、阴性对照组、单纯加压组、加压联合不同浓度α-硫辛酸干预组。正常对照组和单纯加压组不做任何处理;阴性对照组仅接受200μmol/Lα-硫辛酸预处理;加压联合不同浓度的α-硫辛酸干预组分别用50、100、200μmol/L等3种不同浓度的α-硫辛酸对其进行干预。α-硫辛酸预处理1h后,单纯加压组和各干预组置于50mmHg（1mmHg=0.133kPa）下培养24h;正常对照组、阴性对照组置于常压下培养24h。分别用噻唑蓝比色法检测各组细胞的活性;4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色观察各组细胞核形态改变;实时聚合酶链反应（Real-timePCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测并比较各组细胞中锰超氧化物歧化酶（MnSOD） mRNA和蛋白表达水平的变化。结果单纯加压组细胞活性为（65.6±3.4）%,50、100、200μmol/L3种浓度的α-硫辛酸干预组细胞活性分别为（75.1±3.3）%、（81.8±2.9）%、（87.9±3.1）%,均较单纯加压组显著增高（t=5.108、10.007、12.513,P＜0.05）。DAPI染色显示,加压后RGC-5细胞核可见空泡、染色质高度凝聚、边缘化等典型的凋亡特征,而α-硫辛酸干预组仅有部分细胞核染色质表现出浓缩现象。Real-time PCR及Western blot检测结果显示,加压培养后细胞内MnSOD mRNA和蛋白相对表达量较正常对照组显著降低（t=22.045、26.979,P＜0.01）;与单纯加压组相比,α-硫辛酸干预组细胞内MnSOD mRNA和蛋白相对表达量均显著增高,差异有统计学意义（t=9.171、12.267、23.567、7.723、12.009、28.198,P＜0.05）;不同浓度的α-硫辛酸干预组之间,随α-硫辛酸浓度增加,MnSOD mRNA和蛋白相对表达量呈升高趋势,且差异有统计学意义（F=134.273、194.597,P＜0.01）。结论应用α-硫辛酸可以显著提高高压条件下大鼠RGC的细胞活性及细胞内MnSOD的表达水平,增强细胞抗氧化损伤能力。