15-脂氧合酶-1基因转移抑制小鼠视网膜新生血管的实验研究

摘要

目的观察15-脂氧合酶-1（15-LOX-1）基因转移对氧诱导小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法 7日龄C57BL/6J小鼠96只,随机分为正常对照组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型组、基因治疗组和空白载体组。将小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为（75±2）%的氧箱内饲养5d后转移至正常环境中饲养5d,建立OIR模型。小鼠出生后第12天基因治疗组玻璃体腔注射携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和小鼠15-LOX-1基因的重组腺病毒（Ad-15-LOX-1-EGFP）载体1μl;空白载体组注射等量携带EGFP的重组腺病毒（Ad-EGFP）载体。注射后第2天行视网膜铺片荧光显微镜观察EGFP的表达。注射后第5天行免疫荧光染色法、实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测15-LOX-1基因转染视网膜的表达;视网膜铺片观察视网膜血管变化,测量视网膜无灌注区和新生血管的相对面积;石蜡切片苏木精-伊红染色并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。结果 Ad-15-LOX-1-EGFP注射第2天,视网膜铺片上观察到EGFP的表达。免疫荧光染色结果显示,15-LOX-1基因转染视网膜主要表达在外丛状层、内核层和神经节细胞层。基因治疗组15-LOX-1蛋白和mRNA表达水平明显高于OIR模型组和空白载体组,差异有统计学意义（t蛋白表达水平 =22.74、24.13,tmRNA表达水平=12.51、13.40;P＜0.01）;基因治疗组视网膜无灌注区和新生血管面积较OIR模型组和空白载体组显著减小,差异有统计学意义（t无血管区面积 =16.22、14.31,t新生血管面积 =9.97、9.07;P＜0.01）;基因治疗组中突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核与OIR模型组和空白载体组比较明显减少,差异有统计学意义（t=14.25、11.62,P＜0.01）。结论 15-LOX-1基因转移不仅可以减少氧诱导小鼠视网膜无灌注区面积,并且对视网膜新生血管有显著的抑制作用。