氧诱导视网膜病变小鼠模型微小RNA表达谱分析

摘要

目的分析氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠模型的微小RNA表达谱,筛选可能与视网膜新生血管（RNV）形成有关的微小RNA。方法 7日龄健康C57BL/6J小鼠52只随机分为正常对照组和OIR组,每组26只。OIR组建立OIR小鼠模型;正常对照组不做任何处理。小鼠17日龄时,行视网膜铺片,观察视网膜血管形态;行视网膜石蜡切片,计数突破内界膜的视网膜血管内皮细胞核数;行微小RNA芯片分析,检测具有差异表达的微小RNA,再应用实时聚合酶链反应（RT-PCR）进行验证。结果正常对照组小鼠视网膜血管平滑、均匀有序分布;OIR组小鼠周边视网膜血管纡曲、紊乱并伴有新生血管芽,中央视网膜无灌注区明显。正常对照组、OIR组小鼠视网膜无灌注区的相对面积分别为（6.57±3.6）%、（25.81±2.12）%;OIR组小鼠视网膜无灌注区的相对面积较正常对照组明显增大,差异有统计学意义（t=28.71,P＜0.001）。光学显微镜观察发现,正常对照组小鼠内界膜结构完整、平滑,血管内皮细胞排列整齐,偶见突破内界膜的血管内皮细胞核。正常对照组、OIR组平均每张切片突破内界膜的视网膜血管内皮细胞核数分别为（0.16±0.31）、（28.41±4.01）个。两组平均每张切片突破内界膜的视网膜血管内皮细胞核数比较,差异有统计学意义（t=54.45,P＜0.001）。微小RNA芯片分析结果显示,与正常对照组比较,OIR组有21个微小RNA的表达发生了1.5倍以上的变化。其中,上调者9个,下调者12个。差异表达倍数≥3.0的微小RNA为miR-3078、miR-140、miR-29b、miR-29c。RT-PCR检测发现,差异表达倍数≥3.0的4个微小RNA,其表达趋势与芯片分析结果一致。与正常对照组比较,OIR组miR-3078的表达明显上调,差异有统计学意义（t=-2.380,P＜0.05）;miR-140、miR-29b、miR-29c的表达明显下调,差异也有统计学意义（t=2.638、2.323、2.415,P＜0.05）。结论OIR小鼠模型的微小RNA表达谱中,miR-3078、miR-140、miR-29b、miR-29c的差异表达倍数≥3.0,其可能与RNV形成有关。