视网膜Müller细胞条件性基因敲除血管内皮生长因子对氧诱导视网膜病变小鼠的影响

摘要

目的观察视网膜Müler细胞条件性基因敲除血管内皮生长因子（VEGF）对氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠的影响。方法应用Cre-Loxp重组酶技术建立Müler细胞条件性基因敲除VEGF小鼠。Cre阳性为敲除VEGF（CKO）小鼠,Cre阴性为未敲除VEGF（NKO）小鼠。CKO小鼠（CKO组）、NKO小鼠（NKO组）各取20只建立OIR模型,观察两组小鼠在建模过程中的死亡率。小鼠17日龄时,行荧光血管造影视网膜铺片观察小鼠视网膜血管形态,计算无血管区面积占全视网膜面积的百分比;行视网膜石蜡切片苏木精伊红染色计数突破内界膜的血管内皮细胞核数;免疫荧光组织化学染色观察小鼠视网膜中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达。结果 OIR建模过程中,CKO组、NKO组小鼠总死亡率分别为65.00%、30.00%;两组小鼠总死亡率比较,差异有统计学意义（X~2=4.912,P=0.027）。CKO组小鼠视网膜正常血管化推迟,可见大片无血管区,新生血管丛少见,整个视网膜单薄、无层次感;NKO组小鼠视网膜正常血管网状结构可见范围较大,血管密度较高,新生血管丛多见,荧光素渗漏较明显。CKO组、NKO组小鼠视网膜无血管区面积占全视网膜面积的百分比分别为（28.31±11.15）%、（16.82±7.23）%;两者比较,差异有统计学意义（t=2.734,P=0.014）。CKO组、NKO组小鼠平均每张切片突破内界膜的血管内皮细胞核数分别为（26.10±6.37）、（28.80±7.59）个;两者比较,差异有统计学意义（t=2.437,P=0.016）。CKO组、NKO组小鼠视网膜均可见HIF-1α呈阳性表达,主要位于神经节细胞层和光感受器细胞层;CKO组小鼠视网膜HIF-1α阳性表达强于NKO组。结论 Müler细胞条件性基因敲除VEGF明显减弱新生小鼠在OIR环境中的生存能力,抑制部分视网膜新生血管的同时推迟了视网膜正常血管化。