磷脂酰肌醇3激酶抑制剂诱导猪卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗的研究

摘要

目的观察磷脂酰肌醇3激酶（PI-3K）抑制剂——沃曼青霉素（wortmannin）诱导猪卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗（IR）后,其信号传导通路中葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）基因表达的变化。方法采用猪卵巢颗粒细胞体外培养,分别以浓度为0、1.0、1.5、3.0、5.0μmol/L 的 wortmannin 作用48h 后,以氚标记葡萄糖法及葡萄糖氧化酶法检测细胞的葡萄糖消耗量,以免疫荧光法分析 GLUT4、MAPK 蛋白定位表达情况,以 RT-PCR 方法对 GLUT4、MAPK 的 mRNA 进行半定量分析。结果浓度为1.5μmol/L 的 wortmannin 降低细胞对葡萄糖的摄取量最高达40%（P＜0.05）,残余葡萄糖含量增多约13.76%,出现明显的 IR。免疫荧光法结果显示 GLUT4、MAPK 蛋白主要在细胞质表达。RT-PCR 结果提示,GLUT4基因表达水平降低21.06%,MAPK 表达水平升高56.43%。结论 wortmannin 可干扰细胞内的糖代谢信号传导通路,诱导 IR 的发生;同时可放大有丝分裂信号传导通路。