Dyrk1b蛋白在不同程度子宫颈病变组织及子宫颈癌细胞中的表达及意义

摘要

目的探讨双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1b （Dyrk1b）蛋白在不同程度子宫颈病变组织及子宫颈癌细胞中的表达及意义。方法 （1）组织标本检测:选取2011年1月至2013年12月间就诊于大连医科大学附属第一医院, 经病理检查证实的子宫颈鳞癌75例（其中Ⅰ期60例, Ⅱ期15例）、低级别鳞状上皮内病变（LSIL） 12例、高级别鳞状上皮内病变（HSIL ）40例患者的石蜡组织标本;另取同期经病理检查确诊的28例慢性子宫颈炎患者的子宫颈组织为对照。采用免疫组化SP法检测不同程度子宫颈病变组织中Dyrk1b蛋白的表达情况, 并分析子宫颈癌组织中Dyrk1b蛋白的表达与其不同临床病理指标的关系。（2）细胞实验:采用子宫颈癌细胞系HeLa和SiHa细胞, 实验分为两组, 实验组细胞中加入Dyrk1b抑制剂——AZ191, 对照组细胞中不加AZ191。采用蛋白印迹法检测不同浓度（5、10 μmol/L）的AZ191作用后两组细胞中Dyrk1b蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度（2.5、5、10、25、50、100 μmol/L）的AZ191作用后两组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测不同浓度（5、10 μmol/L）的AZ191作用后两组细胞的凋亡情况。结果 （1）免疫组化SP法检测显示, 慢性子宫颈炎、LSIL、HSIL和子宫颈鳞癌组织中Dyrk1b蛋白阳性表达率分别为11% （3/28）、1/12、42%（17/40 ）、71%（53/75）, 子宫颈鳞癌明显高于慢性子宫颈炎、LSIL、HSIL（P＆0.01）;HSIL明显高于慢性子宫颈炎、LSIL （P＆0.05）;而LSIL与慢性子宫颈炎比较, 差异无统计学意义（P＆0.05）。子宫颈鳞癌组织中Dyrk1b蛋白的表达与子宫颈肌层浸润深度显著相关（P＆0.01）, 而与年龄、临床分期、淋巴结有无转移以及血清鳞状上皮细胞癌抗原（SCC-Ag）水平均无显著相关性（P＆0.05）。（2）蛋白印迹法检测显示, 不同浓度（5、10 μmol/L）的AZ191作用后, 实验组HeLa和SiHa细胞中Dyrk1b蛋白的表达强度均随着AZ191浓度的增加而减弱, 且均明显弱于对照组。MTT比色法检测显示, 不同浓度（2.5、5、10、25、50、100 μmol/L ）的AZ191作用后, 实验组HeLa和SiHa细胞增殖的抑制率随着AZ191浓度的增加均逐渐增高, 呈明显的浓度依赖性（P＆0.01）;且均明显高于对照组（P＆0.05）。但实验组中同一浓度A2191作用后HeLa细胞与SiHa细胞增殖的抑制率分别比较, 差异均无统计学意义（P＆0.05）。流式细胞仪检测显示, 5 μmol/L的AZ191作用后, 实验组HeLa和SiHa细胞的凋亡率[分别为（12.8±0.7）%、（3.8±1.8）%]分别与对照组[分别为（9.1±0.9）%、（2.2±1.1 ）%]比较, 差异均无统计学意义（P＆0.05）;而10 μmol/L的AZ191作用后, 实验组HeLa和SiHa细胞的凋亡率[分别为（15.5±1.1）%、（8.4±3.3）%]均明显高于对照组（P＆ 0.05）。但实验组中同一浓度AZ191作用后HeLa细胞与SiHa细胞的凋亡率分别比较, 差异均无统计学意义（P＆0.05）。结论随着子宫颈病变程度的进展, Dyrk1b蛋白的表达逐渐增高, 子宫颈癌组织和细胞中Dyrk1b蛋白均呈高表达;Dyrk1b抑制剂AZ191下调Dyrk1b蛋白表达后, 可抑制子宫颈癌细胞的增殖, 诱导细胞发生凋亡。