胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库的构建

摘要

目的构建胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库.方法从脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞(PBL)中提取细胞总RNA,经逆转录后用套式多聚酶链反应(PCR)分别扩增抗体轻链Vκ和重链VH基因.先构建Vκ基因库,并使linker与Vκ基因连接,再将VH基因克隆入Vκ基因库,即构建成功单链抗体(ScFv)基因库.随机挑取菌落鉴定后测序.结果从PBL中扩增出人源性Vκ和VH基因,并构建了库容量约为2×106 的ScFv噬菌体抗体基因库.随机挑取克隆的测序结果表明,测定的VH基因与Kabat 的抗体基因库中人抗体VH基因有较高的同源性,证明所克隆的基因属于人抗体可变区基因.结论本实验构建成胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库,为进一步筛选人源性抗脑胶质瘤抗体奠定了基础.