突触囊泡蛋白synaptotagmin Ⅺ的过表达对PC12细胞和聚集小体形成的影响

摘要

目的 构建突触囊泡蛋白synaptotagmin Ⅺ(SytⅪ)重组质粒,观察其在PC12细胞中的表达,以及其对细胞和聚集小体形成的影响.方法 运用人胚脑的cDNA文库作为模板,pcDNA3.1myc-His(-)B质粒作为载体,运用基因克隆技术构建重组质粒,限制性内切酶酶切,测序鉴定重组质粒;运用脂质体将重组质粒导入PC12细胞,Annexin V-PI双染色和免疫荧光观察对细胞的影响.结果 测序鉴定质粒构建成功,过表达SytⅪ导致细胞死亡,增加α-synuclein和vimentin阳性聚集小体的形成.结论 成功构建SytⅪ重组表达质粒,过表达造成对PC12细胞的毒性作用,并促进聚集小体的形成.