人脂肪间充质干细胞的分离培养及冻存前后生物学变化

摘要

目的 有效地分离并扩增人脂肪间充质干细胞(hADSCs),并观察冻存前后hADSCs的一般生物学特征.方法 采用Ⅰ型胶原酶消化的方法从抽脂手术废弃的脂肪组织中分离hADSCs,接种在人脂肪间充质干细胞完全培养基中培养.采用胰酶消化法传代扩增,取处于生长对数期的第3代细胞,以液氮冻存6个月.复苏后以台盼蓝染色检测细胞存活率,MTT法描绘细胞生长曲线；以流式细胞仪检测冻存前后细胞表面分子CD44、CD105、CD29、CD73、CD31、HLA-DR的表达水平.结果 细胞大小均等,呈长梭形漩涡状生长.复苏后细胞存活率可达(91.25±3.02)％；冻存前后细胞生长曲线无明显差别,均呈“S”形；经过2～3 d潜伏期后进入增殖期,7d后进入平台期.冻存前CD44、CD105双阳性细胞占(99.850±0.001)％,CD29、CD73双阳性细胞占(92.600±0.028)％,CD31阳性细胞占(4.186±0.010)％,HLA-DR阳性细胞占(1.02±0.007)％；冻存后CD44、CD105双阳性细胞占(98.060±0.028)％,CD29、CD73双阳性细胞占(91.224士0.041)％,CD31阳性细胞占(3.832±0.009)％,HLA-DR阳性细胞占(1.514±0.006)％.冻存前后上述6种hADSCs表面分子表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 来源于人的脂肪间充质干细胞易于体外培养扩增和冻存,复苏后存活率高,一般生物学特征无明显变化,可用作组织工程的种子细胞.