透明质酸合成酶-2在人腹膜间皮细胞透明质酸合成及胞外基质形成中的作用

摘要

目的明确哪一种透明质酸合成酶是人腹膜间皮细胞合成透明质酸及形成细胞外基质/胞衣样结构的主要酶.方法分离培养人腹膜间皮细胞,以半定量RT-PCR法检测其3种透明质酸合成酶HAAS-1、HAS-2、HAS-3 mRNA水平表达情况.明确正常培养人腹膜间皮细胞主要表达HAS-2mRNA和微量HAS-3 mRNA后,设计HAS-2的反义寡核苷酸序列,以脂质体介导法将其转入正常培养的人腹膜间皮细胞.转染前(O h)、转染后8、24、48 h以RT-RCR法观察HAS-2 mRNA表达情况,并以微粒排除法观察细胞衣样结构面积变化.结果转染后8和24 h,HAS-2 mRNA表达分别下降58%和89%(P均＜0.05);转染后48 h HAS-2 mRNA表达已部分恢复至正常表达的25%水平(P＜0.05).相应地,转染后24 h以微粒排除法观察人腹膜间皮细胞细胞外基质/胞衣样结构面积与细胞体面积比值,亦明显减少至几乎完全消失.作为对照的正义序列和逆转序列则无该作用.结论HAS-2是正常培养人腹膜间皮细胞合成透明质酸以及细胞外基质/胞衣样结构形成的关键酶.