URG11基因介导Wnt/β-catenin信号通路调控EMT参与非小细胞肺癌转移的分子机制研究

摘要

目的 探讨URG11基因介导的Wnt/β-Catenin信号通路调控EMT参与非小细胞肺癌转移的分子机制. 方法 非小细胞肺癌细胞系A549经shRNA质粒转染48h,敲除URG11后收集细胞行后续实验.实验共分两组,分别为敲除URG11的A549细胞组(实验组)和未敲除URG11的A549细胞组(空白对照组).采用Western blott测定β-Catenin及其下游基因cyclinD1、c-myc的蛋白表达,同时用RT-qPCR检测β-Catenin、cyclinD1和c-myc的mRNA表达.并用裸鼠成瘤模型评估URG11基因对NSCLC侵袭性生长的影响. 结果 ①敲除URG11显著抑制Wnt/β-Catenin信号通路在NSCLC细胞中激活.Western blot蛋白质印迹分析显示β-Catenin、cyclin D1和c-myc的蛋白水平在敲除实验组中的表达显著低于对照组(DPI值分别为0.22±0.06 VS 0.77±0.21,0.61±0.09 VS 1.52±0.23,0.42±0.07 VS 0.84±0.14,P<0.05).RT-qPCR结果显示β-Catenin、cyclinD1和c-myc的mRNA在对照组中的表达显著高于实验组(分别为3.52倍,2.58倍和2.19倍,P<0.05).②敲除URG11显著减少异种移植肿瘤体在裸鼠体内侵袭性生长.通过裸鼠异种移植肿瘤模型动态观察了URG11对肿瘤的体内生长作用.与对照组相比,敲除URG11能显著抑制Balb/C裸鼠体内新生肿瘤的重量,第35天实验组VS对照组(0.21±0.04)g VS(0.58±0.08)g,P<0.05,平均抑瘤率为63.79％;同时敲除URG11能显著减少异种移植肿瘤的体积:第21、28、35天的新生瘤体体积,实验组VS对照组(258.33±0.24)mm3 VS(512.86±0.18)mm3,(414.59±0.17)mm3 VS(685.78±0.23)mm3,(423.21±0.36)mm3 VS(986.73±0.14)mm3,P<0.05. 结论 URG11导致的EMT与NSCLC的发生和进展密切相关.