Notch1信号对儿童急性B前体淋巴细胞白血病Foxp3组蛋白乙酰化的影响

摘要

目的探讨Notch1信号对儿童急性B前体淋巴细胞白血病（BCP-ALL）Foxp3基因组蛋白乙酰化的影响及其在调节性T细胞（Treg）异常机制中的作用。方法初诊治疗前的急性BCP-ALL患儿38例, 同年龄健康对照儿童15例, 分别取血备检。采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25hiFoxp3+ Treg细胞比例及Foxp3、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4, CTLA4）、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体（glucocorticoid-induced tumor necrosis factorreceptor, GITR）、CD39、Notch1蛋白表达水平;染色质免疫共沉淀技术检测CD4+T细胞Foxp3基因启动子组蛋白H4乙酰化（H4Ac）及与Notch1受体胞内结合域（Notch1 intracellular domain, NICD1）、p300的结合水平;real-time PCR分析CD4+T细胞Foxp3、早老素1（presenilin 1, PSEN1）、主导控制样蛋白1（mastermind-like transcriptional coactivator 1, MAML1）、SKI交互蛋白（SKI-interacting protein, SKIP）、F-Box和WD40蛋白7（F-box and WD40 domain protein 7, FBXW7）、糖原合成酶3β（glycogen synthase kinase-3 beta, GSK3β）、含锌指结构的转录因子（IKAROS）等mRNA表达水平;ELISA检测血浆中IL-10和TGF-β浓度。结果 （1）与对照组比较, BCP-ALL患儿外周血CD4+CD25hiFoxp3+Treg细胞比例、分化及功能相关分子（Foxp3、CTLA4、GITR、CD39）表达水平和血浆IL-10、TGF-β浓度显著增高（P＆0.05）。（2）BCP-ALL患者Foxp3基因启动子H4Ac及与NICD1、p300的结合水平明显高于对照组（P＆0.05）, 且与NICD1、p300的结合水平和Foxp3转录呈正相关（r=0.58和0.46, P＆0.05）。经竞争性抑制后, BCP-ALL患儿前3项指标均低于未处理组（P＆0.05）;对照组Foxp3基因启动子与NICD1结合水平显著降低（P＆0.05）, 而另2项指标与未处理对照组比较差异无统计学意义（P＆0.05）。（3）与对照组比较, BCP-ALL患儿CD4+ T细胞Notch1、PSEN1、MAML1、SKIP表达水平显著升高（P＆0.05）, 负性调节因子FBXW7表达明显降低（P＆0.05）, GSK3β、IKAROS表达差异无统计学意义（P＆0.05）。结论 FBXW7表达低下所致Notch1信号过度活化可能是导致BCP-ALL患儿Foxp3基因启动子H4Ac及Treg异常的重要因素。