多重PCR快速鉴定分枝杆菌方法的建立

摘要

目的 建立并评估一种快速鉴定分枝杆菌的多重PCR法,为结核病的快速病原诊断提供技术手段。方法 选取16S rRNA、Rv0577、RD9和mtbk20680基因,设计特异性引物,经条件优化,建立多重PCR方法。对非洲分枝杆菌、牛分枝杆菌、卡介苗（BCG）菌株、7种常见的非结核分枝杆菌（NTM）、7种常见的呼吸道病原菌和甘肃省93株结核分枝杆菌（MTB）临床分离株进行检测鉴定,评价其敏感性和特异性。结果 16S rRNA、Rv0577、RD9和mtbk20680基因产物长度分别为543 bp、786 bp、369 bp和231 bp。MTB北京基因型的4个基因均为阳性,而非北京基因型mtbk20680基因为阴性；非洲分枝杆菌、牛分枝杆菌、BCG菌株均为16S rRNA和Rv0577阳性；7种NTM仅16S rRNA为阳性；7种呼吸道菌检测结果均为阴性。93株MTB临床分离株中鉴定为北京基因型菌株的有80株,占86.02%,非北京型菌株有13株,占13.98%。该方法的特异性为100%。结论 该多重PCR法可以准确鉴别分枝杆菌、结核分枝杆菌复合群（MTBC）、NTM、MTB、北京基因型与非北京基因型MTB,具有高度的敏感性和特异性。