PAI-1反义RNA对内皮细胞中PAI-1和血小板源生长因子的影响(简报)rnPAI-1反义RNA对内皮细胞中PAI-1和血小板源生长因子的影响

摘要

@@纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)可以促进动脉粥样硬化(AS)的发展。本实验构建PAI-1反义RNA重组质粒，将其转导入离体培养的主动脉内皮细胞(EC)中，观察其对PAI-1表达的作用及对血小板源生长因子(PDGF)的影响。rn　　体外培养猪主动脉内皮细胞，免疫组化显示CD31抗体染色阳性。取第1～2代细胞进行实验。在PAI-1基因翻译起始位点第二外显子处设计一对引物，进行PAI-1特异片段扩增。PCR纯化产物与克隆载体pGEM-T连接。ApaⅠ和PstⅠ对pGEM-PAI-1重组质粒和pcDNA3.1(-)质粒进行双酶切。电泳回收目的基因片段和载体片段，T4连接酶连接。转化入感受态细菌，扩增培养，提取目的片段，进行DNA循环测序。pcDNA3.1PAI-1表达质粒与转染试剂FuGene6混合后转染细胞。设立未转染EC作为空白对照。在转染后第3天、第5天和第7天收获转染细胞。用3种方法检测PAI-1表达情况。ELISA检测细胞培养液中PAI-1含量。免疫组化法和Western blot检测细胞中PAI-1蛋白表达。免疫荧光法检测反义RNA对EC中PDGF的作用。