用竞争结合法检测HLAⅠ类分子抗原呈递能力

摘要

目的建立弱酸处理后荧光素标记肽竞争结合法分析MHCⅠ类分子抗原呈递能力的方法,并评估其实用性.方法pH2.7～3.1的柠檬酸缓冲液对B淋巴母细胞进行短时处理后,即用IMDM培养液中和pH,然后加入β2微球蛋白、荧光素标记的9肽及竞争肽共同孵育,FACs检测细胞表面的平均荧光强度,以达到50%抑制所需的竞争肽浓度作为衡量竞争肽与MHC分子结合能力的指标.结果通过不同pH的柠檬酸缓冲液处理、处理后不同时间加β2微球蛋白和/或荧光素标记肽、加入不同稀释度的竞争肽等角度,对方法进行评估,结果显示本方法操作简便、结果可靠、非特异性吸附小.结论在排除其它MHCⅠ类分子的干扰后,本方法适合在国情条件下广泛开展MHCⅠ类分子抗原呈递能力及T细胞肽表位筛选等研究.