无细胞百日咳疫苗小鼠中和抗体法的建立及效力评价验证

摘要

目的建立一种无细胞百日咳疫苗的功能性抗体检测方法,为无细胞百日咳疫苗原液及成品的生产一致性评价和效力评价提供一种便捷有效的解决方案。方法优化并使用CHO细胞簇集试验方法检测小鼠免疫血清的百日咳毒素中和抗体滴度。结果确定疫苗样品以1/5人用剂量腹腔免疫20～24 g、5周龄的雌性NIH小鼠10只,4周后采血分离血清,倍比稀释血清用0.1 IU/ml的百日咳毒素国家参考品中和2 h,加入到预先培养的CHO细胞孔中孵育48 h后判定簇集结果,最终不簇集孔的血清稀释倍数的几何均值即为样品中和抗体滴度。不同工艺无细胞百日咳疫苗的中和抗体滴度有显著性差异;不同工艺无细胞百日咳疫苗改良脑腔攻击试验结果通过与不通过的产品中和抗体有明显区分度。结论百日咳毒素中和抗体法大幅减少动物使用量,CHO细胞簇集试验具备一定的重复性和精密性,可以满足不同工艺无细胞百日咳疫苗成品及原液的生产一致性和效力的监测和初步评价。