德氏乳杆菌发酵上清对白念珠菌生物膜形成的抑制作用研究

摘要

目的 研究从定君生胶囊分离出的德氏乳杆菌发酵上清在白念珠菌生物膜形成中的作用及机制,并探索发酵上清中可能的效应成分。方法 从阴道用乳杆菌活菌胶囊定君生中分离培养出德氏乳杆菌,并用质谱仪和基因测序的方法进行鉴定。采用微量孔板结晶紫染色法和导尿管建模法检测发酵上清对白念珠菌生物膜形成的影响,并用Live/Dead荧光染料染色,显微镜拍照观察白念珠菌生物膜的形态学变化。用浓硫酸-苯酚法检测发酵上清对白念珠菌生物膜胞外多糖的影响,平板培养计数法检测发酵上清对白念珠菌生物膜起始黏附作用的影响。将发酵上清进行碱中和、过氧化氢酶处理、胰蛋白酶处理和蛋白酶K处理后,再检测其对白念珠菌生物膜形成的作用,探索发酵上清中可能起作用的成分。采用单因素方差分析或秩和检验对计量数据进行统计分析。结果 成功从定君生中分离鉴定出德氏乳杆菌。德氏乳杆菌发酵上清可以显著抑制白念珠菌生物膜的形成（F=10.804,P=0.000）,并呈现量效关系。形态学检测结果显示发酵上清液处理组的白念珠菌生物膜量明显减少。发酵上清可以降低白念珠菌生物膜胞外多糖的含量（F=17.140,P=0.000）,并显著抑制白念珠菌的黏附。碱中和后的发酵上清（A490=0.675±0.095）、过氧化氢酶处理（A490=0.577±0.118）、胰蛋白酶处理（A490=0.600±0.044）和蛋白酶K处理（A490=0.495±0.084）后的发酵上清比未处理的发酵上清（A490=0.486±0.112）抑膜效果略下降,但与对照组（A490=1.079±0.158）相比,仍然有显著抑制作用（χ2=26.052,P=0.000）,提示发酵上清中起作用的成分主要是有机酸和类细菌素。结论 德氏乳杆菌发酵上清可以显著抑制白念珠菌生物膜的形成,作用机制与降低胞外多糖含量和抑制起始黏附有关,发酵上清中起作用的成分可能为有机酸和类细菌素。